CCK8全稱(chēng)Cell Counting Kit-8，是一種基于WST-8（化學(xué)名為2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）的應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類(lèi)似于MTT，在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線(xiàn)粒體內的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的數量有關(guān)。CCK8法在藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性實(shí)驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面應用廣泛。

注意事項：
    1、接種細胞應選對數生長(cháng)期細胞進(jìn)行，同時(shí)需要選擇合適的細胞濃度。
    2、檢測的時(shí)，試劑加入的時(shí)候沿著(zhù)孔壁加入，不要產(chǎn)生氣泡，否則會(huì )干擾讀數。
    3、檢測OD值范圍在0.1-2之間，較為理想的OD值范圍為1-2。
    4、酚紅和血清對CCK8法的檢測不會(huì )造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
    5、為了個(gè)人安全，建議穿戴實(shí)驗服和一次性實(shí)驗手套操作。

心得體會(huì )：
    1、同MTT實(shí)驗一樣，96孔板的邊緣效應，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養液及里面的藥物會(huì )出現濃縮現象，這樣會(huì )導致數據的誤差較大，因此在實(shí)驗設置的時(shí)候，一般將邊孔留出為空白孔，在孔中加入液體，以使中間孔的水分飽和。
    2、懸浮細胞由于染色困難，一般需要增加細胞數量和延長(cháng)CCK8孵育時(shí)間。
    3、CCK8試劑保存時(shí)間，0-5℃下保存6個(gè)月，-20℃下避光保存1年。
    4、金屬對實(shí)驗結果有影響，實(shí)驗中應想法將其去除。